紫外可見分光光度計(jì)的校準(zhǔn)主要是通過(guò)對(duì)一些有數(shù)值型的技術(shù)指標(biāo)測(cè)試來(lái)進(jìn)行。如波長(zhǎng)準(zhǔn)確度、波長(zhǎng)重復(fù)性、光譜帶寬、雜散光、分辨率、透射比誤差、透射比重復(fù)性、噪聲、基線平直性等，這里主要介紹波長(zhǎng)準(zhǔn)確度和波長(zhǎng)重復(fù)佳、透射比準(zhǔn)確度和透射比重復(fù)性兩個(gè)項(xiàng)目校準(zhǔn)的具體儀器條件或校準(zhǔn)步驟。

　?、俨ㄩL(zhǎng)準(zhǔn)確度和波長(zhǎng)重復(fù)性  若儀器能夠放置低壓汞燈的，按照檢定規(guī)程低壓汞燈進(jìn)行全波長(zhǎng)測(cè)試，否則可用儀器固有的氘灼測(cè)試，取單束光能量方式，掃描速度15nm/min，響應(yīng)快，小帶寬0.1nm，量程0～100%，對(duì)486. 02nm和656. 10nm兩個(gè)單峰進(jìn)行單方向重復(fù)掃描3次，測(cè)量出譜圖上的2條譜線波長(zhǎng)，波長(zhǎng)測(cè)量的平均值與波長(zhǎng)的標(biāo)準(zhǔn)值之差就是波長(zhǎng)準(zhǔn)確度，測(cè)量波長(zhǎng)的大值與小值之差就是波長(zhǎng)重復(fù)性。

　?、谕干浔葴?zhǔn)確度和透射比重復(fù)性  取帶寬2nm，用1套標(biāo)準(zhǔn)石英吸收池分別裝空白溶液和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0．006000%的重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)溶液，在35nm，257nm,313nm，350nm四個(gè)波長(zhǎng)處連續(xù)3次測(cè)量透射比，與檢定規(guī)程中附帶的標(biāo)準(zhǔn)值進(jìn)行比較，測(cè)量平均值與標(biāo)準(zhǔn)值之差就是透射比準(zhǔn)確度，測(cè)量值的大值與小值之差就是透射比重復(fù)性。

　　影響紫外可見分光光度計(jì)光度準(zhǔn)確度的主要因素有以下幾個(gè)方面：

　　①儀器的雜散光。

　　②儀器的光度噪聲。

　?、蹆x器的基線平直度。

　?、軆x器的光譜帶寬。不同的光譜帶寬分析誤差不同；不同試樣有不同的*分析測(cè)試光譜帶寬。

　　⑤波長(zhǎng)準(zhǔn)確度。對(duì)同一物質(zhì)，不同的波長(zhǎng)有不同的摩爾吸光系數(shù)，即不同的靈敏度。

　?、拊嚇拥膩?lái)源，包括樣品的制備和取樣的方法（如稱量、容量、溶劑、試劑、pH值、時(shí)間、溫度等）。

　?、弑壬蟮男阅?，包括比色皿的加工誤差、比色皿的配對(duì)、比色皿的玷污等。

　　由此可知，光度準(zhǔn)確度是一個(gè)綜合性的性能技術(shù)指標(biāo)。要使用紫外可見分光光度計(jì)測(cè)得準(zhǔn)確可靠的數(shù)據(jù)，必須注意上述幾個(gè)方面的影響。特別是在分析測(cè)試時(shí)，如何選擇（或設(shè)定）這些技術(shù)指標(biāo)是非常重要的。應(yīng)該指出的是，紫外可見分光光度計(jì)在同時(shí)給出吸光度誤差和透射比誤差時(shí)，兩者不能相互矛盾。